紫外分光光度法測定過氧化氫含量

關鍵詞：分光光度法；過氧化氫；美析儀器; UV-1500

【原理】

H₂O₂與硫酸鈦（或氯化鈦）生成過氧化物—鈦復合物黃色沉淀，可被H_２SO₄溶解后，在415nm波長下比色測定。在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與H₂O₂濃度呈線性關系。

【儀器和用具】

研缽；移液槍0.2ml和槍頭，5ml×1支；容量瓶10ml×7個，離心管5ml×8支；離心機；UV-1500型紫外可見分光光度計。

【試劑】

100μmol/L H₂O₂試劑；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸鈦；丙酮；濃氨水。

30% H₂O₂指的是過氧化氫溶液的質量比,其密度為1.1g/cm3,而過氧化氫的分子量是34.02,通過這些參數(shù)，我們可以推算出30%的過氧化氫的摩爾濃度為9.7mol/L.

【方法】

1.制作標準曲線：取10ml離心管7支，順序編號，并按表40-1加入試劑。

表40-1  測定H₂O₂濃度標準曲線配置表

待沉淀*溶解后，將其小心轉入10ml容量瓶中，并用蒸餾水少量多次沖洗離心管，將洗滌液合并后定容至10ml刻度，415nm波長下比色。

2.樣品提取和測定：(1)稱取新鮮植物組織2~5g（視H₂O₂含量多少而定），按材料與提取劑1∶1的比例加入4℃下預冷的丙酮和少許石英砂研磨成勻漿后，轉入離心管3000 r/min下離心10min，棄去殘渣，上清液即為樣品提取液。(2)用移液管吸取樣品提取液1ml，按表35-1加入5%硫酸鈦和濃氨水，待沉淀形成后3000rpm/min離心10min，棄去上清液。沉淀用丙酮反復洗滌3～5次，直到去除植物色素。(3)向洗滌后的沉淀中加入2mol硫酸5ml，待*溶解后，與標準曲線同樣的方法定容并比色。

3.結果計算：

植物組織中H₂O₂含量(μmol/g Fw)=

式中  C—標準曲線上查得樣品中H₂O₂濃度（μmol）；

          V_t—樣品提取液總體積（ml）；

          V₁—測定時用樣品提取液體積（ml）；

          FW—植物組織鮮重（g）。