光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。而分光光度法則是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。
隨著行業(yè)的不斷發(fā)展,越來(lái)越多的企業(yè)和行業(yè)運(yùn)用到了光度計(jì),也有大量的企業(yè)進(jìn)入了光度計(jì)并發(fā)展。
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng),以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測(cè)定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。
在可見(jiàn)光區(qū),除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及生長(zhǎng)濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。
1.接通電源,打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān),掀開(kāi)樣品室暗箱蓋,預(yù)熱10分鐘。
2.將靈敏度開(kāi)關(guān)調(diào)至“1”檔(若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”檔時(shí),需選用較上等。)
3.根據(jù)所需波長(zhǎng)轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)選擇鈕。
4.將空白液及測(cè)定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內(nèi),使空白管對(duì)準(zhǔn)光路。
5.在暗箱蓋開(kāi)啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器,使讀數(shù)盤(pán)指針指向t=0處。
6.蓋上暗箱蓋,調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器,使空白管的t=100,指針?lè)€(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測(cè)定管的光密度值,并記錄。
7.比色完畢,關(guān)上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈。
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