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在生物學(xué)中紫外可見分光光度計(jì)有哪些應(yīng)用

更新時(shí)間:2018-12-03      點(diǎn)擊次數(shù):1124
   紫外可見分光光度計(jì)在生物學(xué)的應(yīng)用(application)分析中, 常見的有蛋白質(zhì)含量檢測(cè);一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測(cè)定(gage)。分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)等組成。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測(cè)量模式(pattern), 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的**大吸收峰波長280nm 上, 測(cè)試其吸光度大小, 就可完成對(duì)蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。

  目前(Nowadays), 紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用主要是在定量分析方面。紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。先從生命科學(xué)領(lǐng)域(domain)的應(yīng)用來介紹。紫外可見分光光度計(jì)在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。**主要的是以下5 個(gè)方面。

  1. 蛋白質(zhì)(protein)分析工作中的應(yīng)用

  紫外可見分光光度計(jì)在蛋白質(zhì)的分析(Analyse)中, **主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測(cè);一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測(cè)定??梢姺止夤舛扔?jì)可以測(cè)量和記錄其吸收程度(吸光度)。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)對(duì)紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測(cè)量模式, 將儀器設(shè)備的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的**大吸收峰波長280nm 上, 測(cè)試其吸光度大小, 就可完成對(duì)蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)。

  2. 核酸分析(Analyse)工作中的應(yīng)用

  紫外可見分光光度計(jì)在核酸(Acerbity)分析中的應(yīng)用(application), 主要是用來對(duì)核酸的定量檢測(cè); 因?yàn)楹怂岬奈辗逶?60nm。我們只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見分光光度計(jì)的波長GOTO 到核酸的**大吸收峰260nm 上, 測(cè)試其吸光度大小就是了。

  3. 氨(化學(xué)式:NH3) 基酸分析工作中的應(yīng)用

  紫外可見分光光度計(jì)在氨(化學(xué)式:NH3) 基酸(Acerbity)分析中的應(yīng)用, 主要是用來對(duì)氨基酸的定量檢測(cè)。因?yàn)榘被釋?duì)紫外光的主要吸收波長為230nm, 所以, 我們只要采用光度測(cè)量模式(pattern), 將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO 到氨基酸的**大吸收峰230nm 上, 就可測(cè)試其吸光度大小, 從而計(jì)算出氨基酸的含量。但是, 因?yàn)榘被岱治鰰r(shí), 一般是將它溶合在水中, 而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線, 所以, 在用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)氨基酸分析檢測(cè)時(shí), 要注意防止(fáng zhǐ)干擾的問題。此外, 還需注意: 只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收, 多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱, 測(cè)定(gage)時(shí)要衍生(釋義:演變而產(chǎn)生)化后再測(cè)。

  4. 糖類分析測(cè)試(TestMeasure)工作中的應(yīng)用(application)

  紫外可見分光光度計(jì)在糖的分析(Analyse)中, 主要是作定量檢測(cè)(檢查并測(cè)試)。因?yàn)樘菍?duì)紫外光的主要吸收波長為218nm, 所以, 對(duì)糖類進(jìn)行分析時(shí), 只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO 到氨基酸(含有氨基和羧基的一類有機(jī)化合物的通稱)的**大吸收峰218 nm上, 就可測(cè)試其吸光度大小, 從而計(jì)算出糖的含量。

  5. 多糖(SUGAR)分析測(cè)試工作中的應(yīng)用

  紫外可見分光光度計(jì)在多糖的分析中, 主要也是作定量檢測(cè)(檢查并測(cè)試)。因?yàn)槎嗵菍?duì)紫外光的主要吸收波長為206nm, 所以, 我們只要采用光度測(cè)量模式, 將紫外可見分光光度計(jì)儀器的波長GOTO 到多糖的**大吸收峰206 nm 上, 就可測(cè)試(TestMeasure)其吸光度大小, 從而計(jì)算出多糖的含量。

  但是多糖的分析難度很大。因?yàn)? 在206 nm 處的時(shí)候, 光源(氘燈) 的能量已經(jīng)很弱, 儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低, 光電倍增管的靈敏度(Sensitivity)也很低, 206nm 左右的干擾也很大。所以, 用紫外可見分光光度計(jì)作多糖的分析是很難的事, 目前(Nowadays)許多科學(xué)(science)家正在研究中。

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